細(xì)胞培養(yǎng)過程中的血清沉淀

在日常實(shí)驗(yàn)過程中，一些同學(xué)或多或少都會(huì)遇到血清出現(xiàn)沉淀的情況。那么問題來了：

血清中的沉淀是什么？

這些沉淀是如何產(chǎn)生的？

沉淀對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)造成影響嗎？

如何減少血清沉淀？

如果你也關(guān)心這些問題，那就跟著我們一起，來到今天的血清科普小課堂吧，幫你一篇理清血清沉淀的各種問題！

細(xì)胞培養(yǎng)中

血清沉淀從何而來？

一般來說，血清沉淀的成分可以簡(jiǎn)單分為以下幾種：

1、纖維蛋白：常見的體積比較大的沉淀物，達(dá) 1-2mm，肉眼可見。因?yàn)橐恍┭逶谑占涂焖偬幚磉^程中，存在纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體），處于溶解狀態(tài)，但經(jīng)過濾分裝后，就會(huì)在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白的沉淀。

2、磷酸鈣：會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁的一種沉淀物，并且在 37℃ 培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)增加。這類沉淀物鏡下觀察是一個(gè)小黑點(diǎn)，由于布朗運(yùn)動(dòng)，它們看上去仿佛可以運(yùn)動(dòng)，因此常被誤認(rèn)為是微生物污染。

3、膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)：也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

細(xì)胞培養(yǎng)中

血清沉淀有何影響？

血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？

一般情況下，沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，但如果細(xì)胞對(duì)于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有特殊需求，沉淀物中的成分不能被細(xì)胞吸收，可能會(huì)引起細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)較差。

血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞實(shí)驗(yàn)嗎？

會(huì)影響血清過濾。一些特殊實(shí)驗(yàn)中，需要對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，混入培養(yǎng)基中，會(huì)導(dǎo)致過濾孔被堵塞，影響過濾效果。

血清沉淀導(dǎo)致細(xì)胞污染嗎？

一般情況下，正常的沉淀物不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞污染。

但多數(shù)情況下，血清沉淀會(huì)對(duì)我們判斷細(xì)胞是否出現(xiàn)污染造成困擾。

絮狀沉淀容易和真菌、細(xì)菌混淆；磷酸鈣沉淀引起的小黑點(diǎn)容易與支原體污染混淆。

細(xì)胞培養(yǎng)中

血清沉淀從何而來？

剛出廠的血清，應(yīng)該是澄清透明的，為了保證品質(zhì)，血清會(huì)儲(chǔ)存在-20℃的環(huán)境中。如果運(yùn)輸過程中，出現(xiàn)了溫度忽高忽低，反復(fù)凍融的情況，就容易析出大量沉淀。

另外，不正確的解凍方法也會(huì)引起血清產(chǎn)生大量沉淀。

細(xì)胞培養(yǎng)中

如何減少血清沉淀？

1、正確的運(yùn)輸溫度：運(yùn)輸過程中，要嚴(yán)格-20℃低溫，避免反復(fù)凍融。

2、使用正確的融化方法：在使用時(shí)，正確的解凍方法也很重要，這里推薦使用國(guó)際上通用的“三步法”解凍。

需要注意的是，如果血清是儲(chǔ)存在-80℃冰箱中，正式解凍前應(yīng)先轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱中過渡。

一次解凍后，分裝至無菌離心管中，盡量保證每管是一次的用量，分裝管解凍也遵循三步法，解凍后需全部用完。

3、使用正確的儲(chǔ)存方式：長(zhǎng)期儲(chǔ)存在 2-8℃或在室溫下放置時(shí)間過長(zhǎng)，都會(huì)引起沉淀，建議配制好的*培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超過7天，血清分裝好后-20℃儲(chǔ)存。

4、特殊的處理：γ射線照射與熱滅活也容易引起沉淀析出，因此要注意射線照射劑量以及熱滅活方法（40℃水浴加熱20分鐘即可）。

細(xì)胞培養(yǎng)中

如何去除沉淀？

如果要除去血清中的沉淀，可以將血清分裝至無菌離心管中，大約400g 離心，留上清即可。由于濾膜容易被沉淀堵塞，因此不建議用過濾的方法。

血清品質(zhì)

沉淀不是檢驗(yàn)血清的硬指標(biāo)，但為了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確、實(shí)驗(yàn)美觀、實(shí)驗(yàn)便利，還是應(yīng)該盡量減少沉淀的產(chǎn)生。掌握正確的血清解凍、使用方法，再加上一款品質(zhì)穩(wěn)定的優(yōu)秀血清，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)來說，至關(guān)重要。

正確的使用方法與優(yōu)質(zhì)的血清，二者缺一不可。

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