培養(yǎng)細(xì)胞生存途徑和物質(zhì)代謝與體內(nèi)細(xì)胞基本相同，隨生存環(huán)境改變出現(xiàn)一定差異。

（一）環(huán)境

培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證培養(yǎng)細(xì)胞生存的首要條件。保證細(xì)胞生存環(huán)境無任何污染、代謝物及時清除，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

(二)溫度：

人哺乳動物：36.5℃±0.5℃;

鳥類：38.5℃;

培養(yǎng)細(xì)胞對低溫耐受力比高溫強(qiáng)；溫度上升不超過39℃時,細(xì)胞代謝強(qiáng)度與溫度成正比。

39～40℃1小時,受損傷的細(xì)胞可能恢復(fù)；

41～42℃1小時,嚴(yán)重?fù)p傷,個別細(xì)胞恢復(fù)；

43℃以上1小時，細(xì)胞全部死亡

溫度不低于0℃時,細(xì)胞代謝有影響,無傷害作用;

置于 25～35℃，細(xì)胞能生存，但生長速度減慢；

放在 4℃ 數(shù)小時,再放回 37℃ 細(xì)胞仍繼續(xù)生長。

細(xì)胞代謝隨溫度降低而緩慢，溫度降至冰點以下時,細(xì)胞因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。

(三)氣體環(huán)境和氫離子濃度

氣體：氧氣和二氧化碳

氧氣:參與三羧酸循環(huán)產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分。

開放式培養(yǎng)(碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng))細(xì)胞置于95％空氣加5％二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

CO2：細(xì)胞代謝產(chǎn)物, 是細(xì)胞所需成分。

主要作用:維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH7.2~7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。

有些細(xì)胞存在差異。如羊水細(xì)胞培養(yǎng)檢測染色體時pH為7.6。

細(xì)胞耐酸比耐堿性大一些,在偏酸性環(huán)境中更有利于細(xì)胞生長。

為了維持培養(yǎng)液恒定的pH，常用磷酸緩沖劑方法。

磷酸緩沖劑中NaHco3,可供給CO2但容易逸出，適用：封閉式培養(yǎng)的細(xì)胞。（無CO2培養(yǎng)箱）

Hanks平衡液：含有低濃度的NaHCO3,當(dāng)打開含有Hank液培養(yǎng)瓶時，CO2迅速逸出而導(dǎo)致酚紅指示劑變紅，表明培養(yǎng)液pH變堿，細(xì)胞在堿性的環(huán)境中時間過長可使細(xì)胞堿中毒。

羥yi基pai嗪乙硫磺酸(N`-2-Hydroxyethyl Piperazine-N`-Ethanesulfonic Acid縮寫HEPES)

HEPES：對細(xì)胞無毒性也不起緩沖作用，主要作用是：防止pH迅速變動，在開瓶通氣培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時能維持恒定的pH。

（四）細(xì)胞生存所需基本物質(zhì)

與體內(nèi)基本相同，除碳水化合物、氨基酸、脂類三大類營養(yǎng)物質(zhì)外，一定量的無機(jī)鹽、維生素和微量元素等，但需要的量以及代謝方式與體內(nèi)細(xì)胞不盡相同。

糖：六碳糖是主要的能源通過糖酵解 形成 乳酸和通過檸檬酸形成 CO2。

胚胎細(xì)胞和一些轉(zhuǎn)化細(xì)胞的培養(yǎng)基中常見到乳酸堆積現(xiàn)象。

糖是合成某些氨基酸的原料；

經(jīng)過乙酰fu酶A（CoA）合成脂肪；

經(jīng)過糖解磷酸通路能合成核酸。

各種糖的吸收取決于它們進(jìn)入細(xì)胞的能力,其中葡萄糖*,半乳糖zui低。

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