解讀：『血清融化三步法——讓血清更好用』背后的秘密原理！

更新時(shí)間：2020-06-04 | 點(diǎn)擊率：2519

提起細(xì)胞培養(yǎng)中，牛血清的融化，大家首先想到的就是4℃過(guò)夜法。今天小威把上流行多年的『血清融化三步法』介紹給大家，讓你知道怎樣讓你的血清，通過(guò)合適的融化，事半功倍！

與4℃過(guò)夜法相比,三步法為什么對(duì)血清更好呢？重點(diǎn)有二！

其一：關(guān)系到沉淀出現(xiàn)的幾率！

記得嗎？血清在融化過(guò)程中，瓶子里冰塊的底部你會(huì)看見(jiàn)亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線(xiàn)，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點(diǎn)高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級(jí)冰淇淋和大棒冰的區(qū)別，你懂得！）試想，如果采用4℃過(guò)夜的方法，1瓶500毫升的血清融化好，大約需要10小時(shí)左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出，（大多是脂蛋白和纖連蛋白），這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。

采用三步法，只要2.5個(gè)小時(shí)，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過(guò)程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時(shí)間，而且大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。

血清融化過(guò)程中，蛋白質(zhì)會(huì)比水先融化。冰塊底部亮亮的細(xì)絲就是融化中的蛋白

其二：血清在培養(yǎng)細(xì)胞中，重要的是利用它的活性的因子，因此，融化過(guò)程中大限度地保留因子的活性，就變得非常重要。回憶一下，細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)，要保持細(xì)胞的活性，我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢？快融！血清同樣如此！三步法需要兩個(gè)半小時(shí)，4℃過(guò)夜需要大約10個(gè)小時(shí)（冰箱一般設(shè)2-8℃，所以各實(shí)驗(yàn)室融化時(shí)間會(huì)稍有出入）。哪個(gè)速度對(duì)保留活性更好？不言而喻！

下面，我們詳細(xì)解讀『血清的三步融化法』的步驟：

圖：剛從-28℃拿出的血清，是這個(gè)樣子的

融化血清第1步

溫度：室溫

時(shí)間：100ml - 35分鐘

500ml - 90分鐘

1000ml - 100分鐘

或

溫度：15-20℃水?。ㄐ陆拥淖詠?lái)水24℃上下）

時(shí)間：100ml - 5分鐘

　　 500ml - 18分鐘

　　 1000ml - 20分鐘

　　圖：這是近Ausbian血清的大區(qū)經(jīng)理周博，在天津血研所實(shí)驗(yàn)室拍到的——實(shí)驗(yàn)人員三步法化血清的圖片，為了節(jié)約時(shí)間，實(shí)驗(yàn)人員采取的是第步20℃水浴18min的方法。（用現(xiàn)接1的自來(lái)水放入冰凍的血清，即可達(dá)到20℃水浴的效果。一般實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有能制冷到20℃的水浴鍋）

　　融化血清第二步

　　溫度：20℃水?。ㄐ陆拥淖詠?lái)水24℃上下）

　　時(shí)間：100ml - 15分鐘

　　 500ml - 25分鐘

　　 1000ml - 30分鐘